本文使用岛津Nexera MX System平行液相系统和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用，建立了血清中25-羟基维生素D2/D3的定量检测方法，并依据临床检验相关指导原则完成了方法学验证。实验结果表明，该方法对血清中25-羟基维生素D2/D3测定的可报告范围分别为为0.3900 – 50.00 ng/mL、1.172 – 150.0 ng/mL；精密度（CV%）分别为1.6 - 3.1%，准确度范围分别为96.9 - 106.9%。该方法分析速度快、稳定性和准确度好，且大大提高了分析效率，节省仪器采购与检测成本，适用于血清中25-羟基维生素D2/D3的定量分析，能够为临床检验行业的从业人员提供参考。