本文建立了一种使用岛津超临界色谱仪Nexera UC和三重四极杆质谱仪LCMS-8060联用同时测定血清中25-OH维生素D3的含量，方法快速，安全。进样量低，使用内标法在0.9 ng/mL~90.0 ng/mL浓度范围内绘制标准曲线，线性良好，相关系数为0.9993。对高中低三质控样品进行批次内以及批件监测，重现性低于4.68%，重现性良好。