本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪Nexera XR和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用测定牛黄中猪脱氧胆酸、胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸的方法。牛黄样品用甲醇充分溶解，经Shim-pack XR-ODS III(2.0 mm I.D.×75 mm L., 1.6 μm)色谱柱分离，多反应监测模式(MRM)测定。结果显示，在20～2000 ng/mL范围内，胆酸及四种脱氧胆酸线性良好，线性相关系数>0.997，准确度介于87.0%～109.8%之间；40 ng/mL连续进样6针，保留时间及峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.227%~0.400%、1.145%~5.042%。该方法可用于牛黄及人工牛黄中胆酸及脱氧胆酸类化合物的测定。