本文使用岛津在线蛋白酶切液相色谱Perfinity iDP和三重四极杆质谱仪LCMS-8060联用建立α-酪蛋白的定量分析方法。首先通过Skyline软件完成α-酪蛋白特征肽段的筛选和MRM碰撞能量优化，然后再结合Perfinity iDP配套软件自动生成的酶切、脱盐和分析时间程序，从而构建完整的α-酪蛋白LC-MS/MS定量分析方法。本文完成了α-酪蛋白的定量分析方法开发，定量特征肽段为YLGYLEQLLR（634.35>991.55），线性范围30 mg/L~3000mg/L。该方法前处理简单，避免了传统手动酶解的繁琐工作，分析速度快、重复性好、灵敏度高。