本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪，建立了6分钟快速分析血清中25(OH)D3和25(OH)D2的检测方法。在最优条件下2种VD在5.00~200 pg/?L线性范围内，相关系数为0.9994和0.9987。对低中高不同浓度的血清加标样品进行精密度实验，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差分别0.18~0.34%和0.99~6.57%之间。25(OH)D3和25(OH)D2方法检出限分别为0.70 pg/?L和1.41 pg/?L，定量限分别为2.33 pg/?L和4.69 pg/?L；不同浓度加标回收率在102.01~111.71%之间。实验结果表明该方法分析速度快、线性良好、灵敏度高、稳定性好、准确度优异，可用于血清中25(OH)D3和25(OH)D2的快速准确定量分析。