本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用测定牛奶中6种常见β-内酰胺类抗生素残留的检测方法。该方法在2.5 min内完成青霉素G、青霉素V、苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素六种常见β-内酰胺类抗生素的分离。在牛奶基质中青霉素G、青霉素V、苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素在0.2~500 ng/mL范围内线性良好，标准曲线的相关系数均在0.996以上。用牛奶基质配制浓度为5 ng/mL、50 ng/mL、200 ng/mL的标准溶液考察重复性，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.03~0.12%和2.43~4.96%之间，仪器精密度良好。牛奶中6种常见β-内酰胺类抗生素的定量限在0.038~0.085 ng/mL之间，检出限在0.011~0.025 ng/mL之间。