本文利用岛津超高效液相色谱仪Nexera LC-40XR连接荧光检测器RF-20A XS及四极杆飞行时间质谱LCMS-9030联用系统建立了单抗游离N糖的分离与鉴定方法，对曲妥珠单抗的N糖进行了定性与定量分析。该方法使用PNGaseF酶将N糖从单抗中释放出来，并利用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）进行标记，之后使用荧光检测器RF-20A XS与四极杆飞行时间质谱LCMS-9030进行检测，荧光检测器的峰面积用于N糖的相对定量，高分辨质谱得到的精确质量数可对各峰进行定位。连续进样6针，色谱中所有峰的峰面积和保留时间的RSD均小于3%, 质谱中各糖型的质量数偏差均小于2 ppm，最后通过峰面积计算出了各个糖型的丰度比。该方法稳定可靠，峰面积和保留时间的重复性及质量准确度均符合要求。