本文参考2020版《中国药典》九味羌活丸相关检查标准，建立了一种使用岛津高效液相色谱仪LC-20A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用测定九味羌活丸中马兜铃酸I含量的方法。实验结果表明：在本系统条件下，空白溶剂对马兜铃酸I检测无干扰；马兜铃酸I在1~100 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数为0.9998；对20 ng/mL的对照品溶液重复进样6针，保留时间和峰面积的RSD分别为0.055%和2.90%，仪器精密度良好；6次加标回收实验中，马兜铃酸I的平均回收率为96.23%，RSD为2.18%，方法准确度良好。该方法为采用LC-MS/MS方法检测马兜铃酸I的检测人员提供很好的参考。